典型微生物DNA抽提試劑盒包含以下核心試劑:
細胞裂解液:含表面活性劑(如SDS)和螯合劑(如EDTA),破壞細胞膜和細胞壁。
蛋白酶K:消化蛋白質(zhì),防止DNA被核酸酶降解。
柱式純化材料(如硅膠膜):選擇性結(jié)合DNA,通過離心分離純化DNA。
洗滌緩沖液:去除鹽類、蛋白質(zhì)等雜質(zhì)。
回收緩沖液(Elution Buffer):溶解DNA,便于長期存儲(通常為TE緩沖液或無菌水)。
附加試劑:如RNase A(去除RNA)、溶菌酶(針對革蘭氏陽性菌)等,根據(jù)樣本類型調(diào)整。
微生物DNA抽提試劑盒注意事項:
樣本量控制:
避免樣本量過大導(dǎo)致裂解不充分(如細菌沉淀超過試劑盒推薦量),需分次處理或增加裂解液體積。
防止交叉污染:
使用無菌離心管和移液器吸頭,操作前對臺面和手套消毒,避免DNA污染。
避免DNA斷裂:
在加入乙醇沉淀DNA或洗滌步驟中,動作輕柔,避免劇烈震蕩導(dǎo)致DNA剪切。
試劑保存:
蛋白酶K需-20℃冷凍保存,避免反復(fù)凍融;裂解液和洗滌緩沖液需常溫避光保存。
操作環(huán)境:
在超凈工作臺或生物安全柜內(nèi)操作,防止外源DNA或微生物污染。