精準控制試劑濃度與作用時間，遵循 “梯度測試” 原則

支原體祛除試劑的 “治療窗口” 較窄（濃度過低無效，過高則毒性強），需按以下步驟操作：

預實驗梯度測試：使用時，取少量污染細胞，設(shè)置 3-5 個試劑濃度梯度（如說明書推薦濃度的 0.5 倍、1 倍、1.5 倍）和空白對照（僅培養(yǎng)基），培養(yǎng) 24-48 小時后觀察細胞形態(tài)（是否出現(xiàn)皺縮、脫落）和存活率（如臺盼藍染色檢測），選擇 “無明顯細胞毒性且能抑制支原體” 的最佳濃度。

嚴格按說明書控制作用時間：

多數(shù)抗生素類試劑需連續(xù)作用 5-7 天（1 個支原體增殖周期約 6-8 小時，需覆蓋 3-4 個周期以清除），不可隨意延長（易導致細胞耐藥性或積累毒性）；

酶解類試劑作用時間較短（通常 24-36 小時），需按時更換新鮮培養(yǎng)基，避免試劑殘留對細胞的長期損傷。

避免與其他抗生素 / 添加劑混用，防止相互作用

禁止將支原體祛除試劑與常規(guī)細胞培養(yǎng)用抗生素（如青霉素、鏈霉素，僅抗細菌，對支原體無效）同時使用 —— 一方面可能增加細胞毒性（如青霉素與四環(huán)素聯(lián)用會抑制細胞蛋白質(zhì)合成），另一方面可能導致試劑成分降解（如部分試劑與含巰基的添加劑（如谷胱甘肽）反應(yīng)，喪失活性）。

若培養(yǎng)基中含生長因子（如 EGF、bFGF），需確認試劑是否與之兼容（可查閱說明書或咨詢廠家），必要時先添加試劑作用 12 小時后，再補加生長因子。

操作過程中避免試劑污染與失效

試劑需按說明書儲存（如 2-8℃冷藏、-20℃冷凍，避免反復凍融），解凍后需在規(guī)定時間內(nèi)使用（如解凍后 48 小時內(nèi)），剩余試劑不可倒回原瓶（防止污染）；

添加試劑時需無菌操作（超凈臺內(nèi)進行，使用無菌移液器和槍頭），避免將外界細菌 / 真菌帶入培養(yǎng)體系，導致 “二次污染”。