支原體PCR絕對定量標準品的說明及復溶操作
更新時間：2022-10-19 | 點擊率：746
支原體PCR絕對定量標準品對支原體PCR或qPCR方法進行驗證，除了可參考試劑盒生產廠家自身的驗證外（盡管它不能*替代用戶自己的驗證，但可提供特異性驗證的一些信息，如使用哺乳動物細胞DNA、某些細菌菌屬DNA等，而不必使用者自己再去嘗試），用戶自己主要是對方法的檢測限和耐用性進行驗證，這里常用的就是10CFU支原體標準品。100CFU標準品可作為一個補充。
支原體PCR絕對定量標準品的說明：
1.定量標準品dna包括支原體基因組dna和細菌基因組dna，用于梯度稀釋后，qpcr標準曲線的繪制。
2.支原體基因組dna用于支原體核酸擴增檢測的方法學驗證，包括確定支原體qpcr方法的檢測限。
3.細菌定量標準品dna用于qpcr檢測水中細菌的精確定量。
復溶操作：
1.標準品短時離心，以收集凍干粉至管底。
2.取試劑盒提供的tris緩沖液（白蓋）100µl，加入到標準品管內（綠蓋）。
3.室溫下靜置5分鐘。
4.渦旋混合10秒鐘，離心5秒鐘。
5.選合適體積的復溶dna用于pcr擴增或梯度稀釋，以制備標準曲線。
支原體PCR絕對定量標準品每批支原體都會提供CFU與基因拷貝數的比值，以方便二者的換算。因為10CFU只能確定PCR能夠達到的檢測限在10CFU以下，但無法具體確定靈敏度的數值。帶DNA拷貝數標定的基因組DNA標準品則可進一步確定檢測限的數值。而且核酸法最終檢測的對象是核酸，而產品的QC主要關注的是支原體，核酸的存在是側面反映支原體存在的一個指標。CFU與基因拷貝數的比值很好地對二者進行了關聯。
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