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支原體被稱為細胞培養中的“隱形對手"，它不會立刻讓培養液渾濁，也不會使細胞大片脫落，卻能在不知不覺中改變細胞的“性格"。下面用通俗的語言，總結一支原體污染后最常見的表現，方便大家快速識別。
1. 生長變慢
倍增時間延長30–50 %，傳代后兩三天仍達不到預期密度，好像細胞“罷工"一樣。
2. 形態“走樣"
貼壁細胞拉絲、邊緣毛糙，出現圓縮；懸浮細胞容易聚成小團，單分散性下降。
3. 代謝異常
同樣接種量，培養液pH下降更快，顏色迅速變黃，但細胞數并未增加，提示“空轉"產酸。
4. 貼壁力下降
輕輕晃動培養皿，細胞成片脫落；胰酶消化時間明顯縮短，提示細胞附著力減弱。
5. 轉染效率驟降
外源質粒或病毒載體產量突然降低，報告基因表達量下滑，重復實驗仍不穩定。
6. 蛋白分泌“失真"
Western Blot或ELISA發現目標蛋白條帶弱、背景高，甚至伴隨非特異條帶增多。
7. 細胞周期偏移
流式檢測顯示G0/G1比例升高，S期減少，仿佛細胞被“按了暫停鍵"。
8. 背景熒光增強
熒光顯微鏡下，細胞質內出現細小亮點或絲狀信號，染色后更易觀察。
9. 凍存復蘇率降低
污染細胞凍存后再復蘇，活率明顯低于同期對照，恢復緩慢。
10. 交叉“感染"
同培養箱其他細胞系也出現類似狀態，提示污染源可能已擴散。
如何進一步確認？
· 取培養上清做快速PCR檢測，30分鐘即可給出結果；
· 或使用熒光染色，高倍鏡下查看細胞周緣是否有微小亮點；
· 定期把“盲樣"送檢，保持監測記錄，形成實驗室標準流程。
一句話：當細胞“狀態莫名下滑"，別忘了把支原體列入排查清單。及時發現、立即處理，才能讓培養回到正軌。祝大家的細胞都健康、實驗順利！
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