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細(xì)胞培養(yǎng)過程中，如果發(fā)生支原體污染，很容易影響細(xì)胞的生長、代謝和行為，導(dǎo)致實驗結(jié)果出現(xiàn)異常。長期存在的支原體污染可能對細(xì)胞系的健康產(chǎn)生負(fù)面影響，甚至可能改變細(xì)胞系的基因表達(dá)和生物學(xué)特性。
因此，細(xì)胞學(xué)相關(guān)的基礎(chǔ)研究中，需要做好嚴(yán)格地衛(wèi)生清潔工作，預(yù)防支原體污染，并使用方便快捷的方法，監(jiān)測實驗室及實驗品中是否存在支原體污染。
如果需要定期檢測細(xì)胞實驗室中的培養(yǎng)物，是否存在支原體污染，推薦使用德國Minerva Biolabs公司生產(chǎn)的Venor® Gem Classic支原體常規(guī)PCR檢測試劑盒。
通過擴增16S rRNA編碼區(qū)來特異性檢測支原體，而真核生物和其他細(xì)菌DNA(除“檢測特征"部分報道的DNA外)在Venor®GeM Classic檢測中不擴增。
根據(jù)支原體種類的不同，擴增子的大小在265-278 bp之間。
Venor®GeM Classic常規(guī)PCR檢測試劑盒經(jīng)典法特點：
1.內(nèi)控對照為獨立包裝，遵循歐洲藥典和日本藥典操作流程。
2.高特異性，僅一條陽性對照條帶，即可涵蓋所有可能感染細(xì)胞的支原體物種。操作簡單，易于觀察。
3.高靈敏度，若PCR反應(yīng)體系加入10μl樣本，支原體檢測限度為≤5或≤10CFU。
4.歐洲藥典要求的26種支原體均可檢出。該試劑盒可檢測出1種脲原體、7種無膽甾原體和85種支原體，與細(xì)胞和真核DNA無交叉反應(yīng)。
5.試劑盒中不含Taq酶，可另外購買。推薦使用德國MB公司的Taq酶。
通過生物技術(shù)生產(chǎn)的藥物、疫苗和其他治療性產(chǎn)品，其制備過程涉及細(xì)胞培養(yǎng)、發(fā)酵和其他復(fù)雜的生物學(xué)過程。如果該過程存在支原體污染，則可能會對產(chǎn)品質(zhì)量產(chǎn)生嚴(yán)重影響，甚至可能引發(fā)潛在的安全隱患。
各國對于生物醫(yī)藥制品的生產(chǎn)過程中，支原體的檢測有著嚴(yán)格的要求。《藥典》中規(guī)定“培養(yǎng)法"和“指示細(xì)胞法"是傳統(tǒng)方法，如果用核酸法替代傳統(tǒng)方法，需要經(jīng)過方法學(xué)驗證。
因此，在選擇臨床項目申報所用的支原體檢測試劑盒時，需選擇通過《藥典》方法學(xué)驗證的試劑盒。需要兼顧靈敏度和特異性。
在常規(guī)PCR基礎(chǔ)上，將『針對支原體特異性保守序列的探針』做熒光標(biāo)記，使PCR擴增后的產(chǎn)物帶有熒光，利用熒光信號的變化和配套軟件，進行DNA擴增反應(yīng)的實時監(jiān)測，簡稱qPCR。
qPCR實驗優(yōu)點：
①靈敏度高、特異性強。
②時間短，2-3小時出結(jié)果
③檢測結(jié)果可定量
④操作簡便
綜上，支原體qPCR檢測試劑盒比較合適的選擇。
德國MB支原體qPCR檢測試劑盒：
Venor®Gem qEP
產(chǎn)品特點：
①經(jīng)典法qPCR試劑盒遵循歐洲藥典流程要求
②高特異性，一次檢測即可涵蓋了所有可能感染細(xì)胞的支原體物種（涵蓋歐洲藥典規(guī)定的9種支原體），根據(jù)序列一致性，至少可以檢測到107種支原體物種。操作簡單，易于觀察。
③高靈敏度，MB公司的支原體qPCR檢測試劑盒經(jīng)典法檢測限可達(dá)到≤10CFU/ml。
④MB公司有相應(yīng)配套的10CFU/100CFU的敏感度測試的標(biāo)準(zhǔn)品，便于方法學(xué)驗證。
⑤MB公司有相應(yīng)配套的支原體基因組DNA和細(xì)菌基因組DNA，便于特異性驗證。
⑥MB公司有相應(yīng)配套的支原體絕對定量標(biāo)準(zhǔn)品，便于最后定量檢測。
⑦內(nèi)控對照為獨立包裝，遵循歐洲藥典和日本藥典操作流程。
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