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隨著細(xì)胞生物學(xué)的發(fā)展，細(xì)胞增殖過(guò)程的奧秘被逐步揭開(kāi)。而牛血清制備技術(shù)的不斷革新，也在一定程度上助力細(xì)胞生物學(xué)的發(fā)展。新生牛血清是一類比較常見(jiàn)的牛血清，營(yíng)養(yǎng)成分的豐富度雖不及胎牛血清，但優(yōu)質(zhì)的新生牛血清，仍然足以供給大部分細(xì)胞的生長(zhǎng)繁殖。Ausbian進(jìn)口新生牛血清，富含各類營(yíng)養(yǎng)成分，內(nèi)毒素含量低。
測(cè)量體內(nèi)細(xì)胞增殖對(duì)我們理解器官發(fā)育、疾病和組織再生具有重要意義。揭示不同細(xì)胞類型的增殖動(dòng)力學(xué)對(duì)于尋找新的疾病治療方法和提供組織再生的新視角也十分重要。檢測(cè)細(xì)胞增殖的成熟方法包括對(duì)組織切片上的增殖標(biāo)記物進(jìn)行免疫染色，在新合成的DNA中加入DNA類似物，以及在細(xì)胞周期中通過(guò)合成代謝檢測(cè)合并的同位素。
然而，目前追蹤細(xì)胞增殖的方法的局限性在不同的生命科學(xué)領(lǐng)域留下了許多未解決的問(wèn)題。
首先，增殖標(biāo)記物的免疫染色只能提供細(xì)胞增殖的快照，使得檢測(cè)罕見(jiàn)的增殖細(xì)胞在技術(shù)上具有挑戰(zhàn)性。其次，目前的檢測(cè)方法不能提供直接的細(xì)胞類型特異性增殖信息。這是一個(gè)重要的問(wèn)題，特別是對(duì)于那些只有較差染色譜系標(biāo)記與增殖標(biāo)記共同免疫染色的細(xì)胞類型。它對(duì)于被其他更頻繁分裂的細(xì)胞包圍的很少增殖的細(xì)胞類型也很重要，其中需要譜系信息來(lái)增加信號(hào)與背景比。
另外，可以評(píng)估純化后細(xì)胞增殖的方法(例如FACS)將能夠研究細(xì)胞類型特異性更新，盡管它們失去了原位增殖信息。生命科學(xué)中的許多爭(zhēng)議可以通過(guò)建立新的增殖檢測(cè)方法來(lái)解決，包括肝穩(wěn)態(tài)和肝損傷后的肝細(xì)胞再生。
譜系追蹤可用于測(cè)量活體細(xì)胞的增殖，并且根據(jù)報(bào)告小鼠系的選擇，它可以用細(xì)胞質(zhì)或核信號(hào)標(biāo)記細(xì)胞。在體內(nèi)追蹤細(xì)胞命運(yùn)廣泛使用的技術(shù)是cre - loxp介導(dǎo)的遺傳譜系追蹤。在這種方法中，Cre重組酶由特定基因的表達(dá)調(diào)控元件驅(qū)動(dòng)，去除報(bào)告基因等位基因中loxp -側(cè)翼的轉(zhuǎn)錄停止盒，從而產(chǎn)生報(bào)告基因的表達(dá)(例如GFP或tdTomato)。人雌激素受體可以與Cre重組酶融合，使Cre活性被他莫昔芬誘導(dǎo)。Ki67的啟動(dòng)子(一種廣泛使用的細(xì)胞增殖標(biāo)記物)已被用來(lái)驅(qū)動(dòng)CreER在他莫昔芬給藥后追蹤Ki67+心肌細(xì)胞。然而，Ki67-IRES-CreER捕獲的增殖心肌細(xì)胞百分比遠(yuǎn)低于同種型合并捕獲的心肌細(xì)胞百分比。這可能是因?yàn)樗舴艺T導(dǎo)的Cre活性只能持續(xù)12-24小時(shí)，因?yàn)樗舴业难灏胨テ凇４送?，?dāng)他莫昔芬治療與Ki67啟動(dòng)子活性不同步時(shí)，Ki67- ires - creer無(wú)法捕獲增殖信號(hào)。因此，隨著時(shí)間的推移，無(wú)縫捕獲Ki67+細(xì)胞是一項(xiàng)技術(shù)挑戰(zhàn)，因?yàn)檫B續(xù)重復(fù)的他莫昔芬治療既麻煩又有害。
近日，研究人員開(kāi)發(fā)了了一種檢測(cè)細(xì)胞增殖的遺傳方法:使用遺傳譜系追蹤技術(shù)以組織特異性的方式實(shí)現(xiàn)體內(nèi)細(xì)胞增殖的無(wú)縫記錄。該研究提供了一個(gè)詳細(xì)的方案(小鼠系的產(chǎn)生，小鼠系的表征，小鼠系雜交和細(xì)胞增殖追蹤)，用于使用該遺傳系統(tǒng)研究細(xì)胞增殖。
這種細(xì)胞增殖追蹤系統(tǒng)，我們稱之為“ProTracer"(增殖追蹤器)，允許對(duì)活體動(dòng)物中特定細(xì)胞系的細(xì)胞增殖進(jìn)行終身無(wú)創(chuàng)監(jiān)測(cè)。與其他需要處死動(dòng)物的短期策略相比，ProTracer不需要采樣或犧牲動(dòng)物進(jìn)行組織處理。為了突出這些特征，研究人員使用ProTracer研究了小鼠肝臟穩(wěn)態(tài)和組織損傷后肝細(xì)胞的增殖。技術(shù)實(shí)現(xiàn)了多個(gè)方面的突破，包括在體內(nèi)長(zhǎng)時(shí)間不間斷地示蹤細(xì)胞增殖，實(shí)現(xiàn)了細(xì)胞類型特異性的細(xì)胞增殖檢測(cè)以及活體檢測(cè)細(xì)胞增殖等。
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