淺談『臨床項目申報』中的支原體檢測

更新時間：2023-02-26 | 點擊率：771

臨床項目申報與支原體檢測

細(xì)胞體外培養(yǎng)過程中，很容易受到支原體污染的困擾。

在生物制品和細(xì)胞治療領(lǐng)域，支原體檢查是保證產(chǎn)品和治療安全的重要一環(huán)。生物源性原材料、采用細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)制備的疫苗、抗體，以及細(xì)胞或基因治療產(chǎn)品在生產(chǎn)過程的不同階段都要進(jìn)行支原體污染的檢查。

歐洲藥典規(guī)定對細(xì)胞治療產(chǎn)品需要進(jìn)行嚴(yán)格的支原體檢測；美國FDA規(guī)定為了提高細(xì)胞生物制品安全性，需要進(jìn)行支原體污染檢測；我國藥典規(guī)定主細(xì)胞庫、工作細(xì)胞庫、病毒種子批、對照細(xì)胞以及臨床治療用細(xì)胞應(yīng)進(jìn)行支原體檢測。

但在項目申報前，需要進(jìn)行支原體檢測。

傳統(tǒng)支原體檢查方法是培養(yǎng)法和指示細(xì)胞培養(yǎng)法，并為藥典所認(rèn)可和收錄。但由于這兩種方法耗時又耗力，因此，近年來，『支原體qPCR檢測』在工業(yè)領(lǐng)域的應(yīng)用越來越多。

但在項目申報前，先需要進(jìn)行方法學(xué)驗證，依據(jù)藥典，在檢測限、特異性和耐用性方面達(dá)到要求后，才能替代傳統(tǒng)的檢查方法。

適合臨床項目申報的支原體檢測和方法驗證，德國Minerva Biolabs（簡稱德國MB）公司已有成熟的產(chǎn)品及商業(yè)化應(yīng)用。

不僅提供有符合國際藥典的『支原體qPCR檢測』試劑盒，更有一系列支原體標(biāo)準(zhǔn)品及輔助產(chǎn)品，用于qPCR方法的全面驗證。

各國藥典對支原體核酸擴(kuò)增檢測方法（簡稱NAT法）的驗證要求略有出入，但均要求對檢出限、特異性和耐用性進(jìn)行驗證。

在檢測方法上，均建議先做樣本的支原體DNA抽提，再進(jìn)行支原體檢測。

如使用商品化試劑盒，則除了需要試劑盒生產(chǎn)商提供完整的方法學(xué)驗證數(shù)據(jù)外，還需要使用者驗證試劑盒對其樣本的適用性，以及試劑盒表現(xiàn)出預(yù)期的性能（例如檢測限、耐用性、是否存在與細(xì)菌的交叉反應(yīng)）進(jìn)行證明。

德國MB公司提供有10CFU檢測限的支原體高敏標(biāo)準(zhǔn)品，可同時用于檢測限和耐用性的驗證。