400-166-8600400-166-8600
細胞培養與內毒素
我們常說，細胞培養過程中，在選購血清的時候，一定要關注血清的“內毒素指標"，同時，內毒素含量也是劃分血清等級的標準之一。
(目前，由于同一廠家，不同批次的血清，內毒素數值也可能有較大差異，因此很多血清廠家在名稱上已不注明級別。但使用者仍可通過檢測報告，自行甄別挑選。)
那這血清中內毒素的高低對細胞培養會有啥影響啊？為什么選血清要選內毒素含量低的呢？
所以今天我們就來聊聊，細胞培養中血清的內毒素問題。
01
人體對細菌內毒素極為敏感
極微量（1-5ng/kg，而1ng≈2.5EU）內毒素就能引起體溫上升，發熱反應持續約4小時后逐漸消退。
自然感染時，因革蘭氏陰性菌不斷生長繁殖，同時伴有陸續死亡、釋出內毒素，故發熱反應將持續至體內病原菌*消滅為止。
內毒素引起發熱反應的原因是內毒素作用于體內的巨噬細胞、中性粒細胞等，使之產生IL-1、IL-6和TNF-α等細胞因子，這些細胞因子作用于宿主下丘腦的體溫調節中樞，促使體溫升高發熱。
由于內毒素是細菌死亡裂解或自溶引起的，因此環境中大量存在內毒素。但是如果在細胞培養過程中，出現了大量內毒素，而細胞要用于某些疾病的治療，回輸人體，這是萬萬不行的。
02
內毒素對細胞培養的影響
細胞遺傳代謝的影響
此前，有人做過實驗，來觀察內毒素對細胞培養的影響，記錄的影響包括：刺激白細胞培養物產生組織因子、激活鼠巨噬細胞，以及通過極低水平（低于 1 ng/mL）的內毒素抑制鼠類紅細胞集落形成等一系列指標。
隨后，發表了許多關于內毒素對體外細胞功能和生長影響的論文。
Morris等人發現（1），只需暴露 6 小時，低至 0.5 ng/mL 的內毒素水平可以增加馬腹膜巨噬細胞中IL-6的產生。Mattern等人發現（2）， 100 ng/mL 內毒素可以刺激人類 T 細胞的增殖及其淋巴因子的產生，但這種刺激需要與先前暴露于內毒素的單核細胞直接物理接觸。Sibley等人報道，10 到 200 ng/mL 內毒素刺激鼠 B 細胞腫瘤細胞系 (70Z/3) 完成 IgM 的產生，然后在細胞表面表達（3）。
從現有的研究可以看出，內毒素對于細胞培養影響還是很大的：
改變細胞外形
活化細胞，產生訊息傳遞物質
抑制酶活性
抑制人工受精的成功率等
血清中內毒素含量過高，更容易導致細胞“亞健康"，造成數據不準，或細胞狀態不良、老化、甚至死亡，導致試驗中斷失敗。所以要盡量選擇內毒素低的血清。
對實驗結果的影響
內毒素會加速細胞衰老、凋亡，細胞提前死亡，影響實驗結果，導致實驗數據產生波動。
參考文獻：
1.Morris,D.D., Crowe, N., Moore, J.N.and Moldawer, L.L. Endotoxin-Induced Production ofInterleukin 6 by Equine Peritoneal Macrophages In Vitro. Am. J. Vet. Res.53:1298-1301 (1992).
2.Mattern, T.,Thanhauser, A., Reiling, N.,Toellner, K., Duchrow, M., Kusumoto, S.,Rietschel,E.T., Ernst, M., Brade, H.,Flad, H.D. and Ulmer, A.J. Endotoxin and Lipid A StimulateProliferation of Human T Cells In the Presence of Autologous Monocytes. J.Immunol. 153:2996-3004(1994).
3.Sibley, C.H.,Terry, A. and Raetz, C.R.H.Induction of K Light Chain Synthesis in 70Z/3 BLymphoma Cells by Chemically Defined Lipid A Precursors. J. Biol. Chem.263:5098-5103 (1988).
03
選擇內毒素低的優質血清
一般來說，細胞或組織培養過程中內毒素污染源通常來自于血清、培養液及外加藥物配制用水等。
所以選擇內毒素含量低的優質血清就顯得尤為重要。
以下幾類情況更應關注內毒素的影響：
1、養干細胞時，干細胞對內毒素非常敏感，如果血清中內毒素≥3EU/ml時，干細胞很容易死亡。
2、養免疫細胞時，過高的內毒素可誘導免疫細胞釋放炎癥因子，抑制小鼠紅細胞集落的形成等。
3、基因敲除相關的細胞實驗，培養的細胞要盡可能保持其原始狀態，任何引導細胞衰老或凋亡的試劑，都會讓后續的實驗結果“失之毫厘，謬以千里"。在準備血清和其他試劑時，選擇極低的內毒素（最好≤1EU/ml），對實驗至關重要。
4、原代培養、雜交瘤融合、細胞轉染，或者肝細胞、神經細胞、內皮等難養細胞的擴增，這些都需要挑選好的血清給細胞以有力支持。因此，挑選更低的內毒素，是保證實驗順利的第一步。
5、實驗室有些細胞，需要長期培養、長期凍存，或者經常復蘇、經常培養的，血清會經常或長時間作用于細胞。為保證細胞的健康，都應該選用更低內毒素的血清，以避免內毒素長久對細胞的毒性影響。
Ausbian進口特級胎牛血清，所有血清出廠前，均經過嚴格質控，每個批次附有詳細完整的《檢測報告》，對內毒素標準及含量有明確的標識，讓實驗者買得放心，用得安心。
Ausbian進口特級胎牛血清
內毒素≤3EU/ml
為細胞實驗保駕護航！
當前位置：