劃重點：細胞培養該如何應對支原體污染！

更新時間：2021-10-15 | 點擊率：913

細胞培養技術的發現，使得很多研究不必局限于在動物或人體內進行，試驗環境更為簡單，目的更為明確，如：細胞內活動的基礎研究；細胞與細胞相互作用；細胞與環境間的相互作用；遺傳學與細胞轉化；細胞產物和分泌等等。

細胞培養物被支原體污染是極普遍的問題，面對支原體污染給細胞培養帶來的巨大難題，世界各國開始重視，并相繼建立了細胞庫，對細胞質量進展控制，效guo顯著，支原體污染的問題得以限制。目前已知能污染細胞的支原體有20多種以上，其中95％以上的支原體污染是口腔支原體。

支原體是目前已知一類能在無生命培養基上生長繁殖的最小的原核細胞微生物，分為兩個屬：一為支原體屬（Mycoplasma），有幾十個種；另一為脲原體屬（Ureaplasma），僅有一種。革蘭染色為陰性，但不易著色，一般用Giemsa染色，染成淡紫色。

支原體的污染來源

（1）細胞之間交叉污染；

（2）細胞培養操作人員的口腔、皮膚等；

（3）工作環境或實驗器材的污染；

（4）培養基的污染。

支原體污染的來源包括工作環境的污染、操作者本身的污染（一些支原體在人體是正常菌群）、培養的污染、污染支原體的細胞造成的交叉污染、實驗器材帶來的污染和用來制備細胞的原始組織或器官的污染。細胞培養工作中，主要從以下幾個方面來預防支原體的污染：控制環境污染；嚴格實驗操作；細胞培養和器材要保證無菌；在細胞培養中加入適量的抗生素。

1、支原體檢測

熒光定量PCR法（qPCR）：是在常規PCR基礎上，將『針對支原體特異性保守序列的探針』做熒光標記，使PCR擴增后的產物帶有熒光，利用熒光信號的變化和配套軟件，進行DNA擴增反應的實時監測，簡稱qPCR。

優點：①靈敏度高、特異性強。

②時間短，2-3小時出結果。

③檢測結果可定量。

④操作簡便。

缺點：①對于已做支原體滅活處理的樣品，由于支原體DNA仍舊存在其中，PCR結果會出現假陽性。（可用培養法做補充驗證）

②不同廠家生產的試劑盒質量差異巨大（由于引物及內在設計不同），需謹慎選擇，盡量在專業人員推薦指導下使用。

德國MB公司生產的支原體qPCR檢測試劑盒（均為探針法檢測），依據操作步驟的細微差別，

分『經典法』和『一步法』兩種。

2、環境空間消毒方案

試驗臺、超凈臺、培養箱、液氮罐、移液器、門把手、電話等細胞培養環境

被支原體污染，可引起細胞的污染。應定期對工作區域進行消毒。

德國MB生產的Mycoplasma-offTM噴霧劑，或濕巾擦拭 5-10分鐘清除，對支原體、細菌、真菌、霉菌、孢子祛除確切有效。無殘留, 無腐蝕, 無致癌性，操作簡單方便。

截圖20211015090715.png

qPCR法介紹：