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一、進入細胞間開始細胞培養時，必須嚴格按照下列步驟操作：
①確定所有的細胞操作用的溶液和耗材都已經消毒并檢測沒有問題，不確定的溶液和耗材請勿使用，除非特殊情況，不要借用別人的溶液。
②確定衣服的袖口已經卷起或者白大褂的袖口已經扎緊。
③確定酒精燈內的酒精量，需要的話及時進行補充。
④確定所有需要用到的溶液和耗材都放在伸手可及的位置。為了方便單手開啟瓶蓋，實驗開始前可以把所有瓶蓋旋松。
⑤盡量不要直接傾倒溶液，除非瓶口沒有被燒壞。如果傾倒失敗，溶液粘在瓶口，請用噴過75%酒精的紙巾仔細清潔瓶口周圍（不要接觸到瓶口）后在火焰上簡單燒灼。
⑥操作時如果不能肯定所用的耗材是潔凈的，必須及時更換。
⑦實驗完畢及時收拾，保持工作區域清潔整齊，最后用75%酒精清潔臺面。
二、細胞污染的預防
①實驗用品防止污染。細胞培養所用試劑、耗材、器材的清洗、消毒要*，各種溶液滅菌要仔細，并在無菌實驗檢測陰性后才能使用。操作室及剩余的無菌器材要定期清潔、消毒、滅菌。
②操作過程防止污染。
③穿著容易起靜電或吸附灰塵的衣物必須更換為白大褂后才能進入細胞間。
④實驗開始前需要確定戴的手套沒有問題，只要接觸過生物安全柜之外的物品，必須及時對手套進行消毒。
⑤進入細胞培養間后關好門，坐下來盡量少走動以免影響生物安全柜的風簾。工作開始前要先用75%酒精棉球擦手和瓶蓋。事先要嚴格檢查所用的器材、溶液和細胞，不要把污染品或未經消毒的物品帶入無菌室內，更不能隨便使用，以免造成大規模污染。
⑥細胞操作時動作要輕，必須在火焰周圍無菌區內打開瓶口，并將瓶口放在火焰周圍簡單轉動燒灼，注意不要讓火焰把塑料瓶口燒化。
⑦實驗操作時生物安全柜的隔板要盡可能放低，盡量減少談話，打噴嚏或咳嗽時絕對不能對著工作區，以免造成不必要的污染。
⑧瓶蓋應當倒放在遠離自己的地方，以避免瓶蓋被誤操作所污染。
⑨不要從敞開的容器口上方經過，以避免衣服上掉落不明物體對細胞的污染。
⑩實驗操作時要注意及時更換巴斯德吸管、移液槍槍頭和移液管，切勿一根管子做到底。一旦發現接觸了非潔凈或者無法確定潔凈的物品必須直接丟棄。實驗完畢應及時收拾，保持實驗室清潔整齊，最后用75%酒精清潔臺面。
三、防止細胞交叉污染
①在進行多種細胞培養操作時，所用器具要嚴格區分，最好作上標記便于辨別。按順序進行操作，一次只處理一種細胞，多種細胞多種操作一起進行時易發生t昆亂。
②在進行換液或傳代操作時，粘有細胞的移液槍頭和移液管不要觸及試劑瓶瓶口，以免把細胞帶到培養基中污染其他細胞。
③所有細胞一旦購置，或從別處引入，或自己建立，必須及時保種凍存，一旦發生污染可重新復蘇細胞，繼續培養。
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