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現(xiàn)在，市面上的支原體清除劑大多是抗生素類的，主要是三種：四環(huán)素類、大環(huán)內(nèi)酯類和喹諾酮類。它們對(duì)支原體的清除作用主要是抑制，而非直接殺死支原體。因此它們的效果不能持久，還會(huì)產(chǎn)生支原體的耐藥和細(xì)胞毒。要想真正有效的殺死支原體，只有德國(guó)Minerva Biolabs公司的Mynox®及Mynox® Gold產(chǎn)品。
Mynox®取自枯草桿菌發(fā)酵后的提取物。由于支原體沒有細(xì)胞壁，只有簡(jiǎn)單的質(zhì)膜。Mynox®基于生物物理原理，只與支原體膜特異性結(jié)合，改變支原體膜的通透性，導(dǎo)致支原體破裂死亡，而哺乳動(dòng)物細(xì)胞能迅速返回它的原來(lái)形態(tài)，并保持正常的增殖速率。直至今日，Mynox®還沒有顯示任何導(dǎo)致正常細(xì)胞特性的改變。
注意：Mynox®用于清除細(xì)胞培養(yǎng)和病毒培養(yǎng)以及生物樣本中的支原體和無(wú)膽甾原體，僅限于基礎(chǔ)研究使用。
下面，簡(jiǎn)單介紹一下Mynox®及其用法：
Mynox®：無(wú)菌即用型，pH7.4，220µl/管，每管用1次
貨號(hào)#10-0200 2 管
貨號(hào)#10-0500 5 管
貨號(hào)#10-1000 10 管
2-8°C保存。室溫運(yùn)輸
建議采用DMEM或RPMI 1640培養(yǎng)基，5%FCS。如果清除病毒中的支原體，應(yīng)使用無(wú)血清培養(yǎng)基。如果是貼壁細(xì)胞，應(yīng)用胰酶消化，把細(xì)胞打散為單細(xì)胞，保證細(xì)胞與Mynox®充分接觸，從而更有效地殺除支原體。
Mynox®的細(xì)胞毒效應(yīng)在10%~80%，依賴于作用時(shí)間長(zhǎng)短。通常能保證有充分存活的細(xì)胞應(yīng)用于繼續(xù)培養(yǎng)。支原體的高清除率帶來(lái)更高的細(xì)胞增殖速率，能夠彌補(bǔ)細(xì)胞毒帶來(lái)的損失。
Mynox®用法：
1、貼壁細(xì)胞
150px培養(yǎng)皿中，先后加2.8ml培養(yǎng)基（5%FCS），Mynox®200 µl，2 ml 細(xì)胞（1x104~1x105）。細(xì)胞繼續(xù)培養(yǎng)2小時(shí)，即完成治療，即可換液。治療可持續(xù)3-8天，不過(guò)需注意觀察細(xì)胞狀態(tài)。
2、懸浮細(xì)胞
無(wú)菌離心管里先后加1.6ml 含0.125%胰酶和5mM EDTA PBS，Mynox®200 µl，1.6 ml細(xì)胞（細(xì)胞數(shù)1x104~ 1x105，10%FBS）。室溫孵育30分鐘即完成治療，即可將細(xì)胞離心換液。（注意：胰酶作用是防止細(xì)胞聚集。如不用胰酶解離細(xì)胞，可用培養(yǎng)基代替胰酶。要保證細(xì)胞與Mynox®混合物的總體積為3.4ml，必要時(shí)添加PBS。）治療也可持續(xù)3天，不過(guò)要觀察細(xì)胞狀態(tài)。
3. 無(wú)包膜病毒
1.5ml無(wú)菌離心管中加入1ml無(wú)血清培養(yǎng)基、100 µl Mynox®、125 µl病毒株和FBS（<8%）。輕輕搖勻，室溫培養(yǎng)2小時(shí)后即完成治療。可用培養(yǎng)基將Mynox®稀釋為1:10，終止反應(yīng)。注意：在病毒感染宿主細(xì)胞前，應(yīng)檢查宿主細(xì)胞系是否有支原體污染。
4、包膜病毒
注意：起始病毒滴度應(yīng)>106TCID50，以保證有足夠病毒能繼續(xù)進(jìn)行下游培養(yǎng)。
15ml無(wú)菌離心管中加入4.4ml無(wú)血清培養(yǎng)基、100µlMynox®、0.5ml病毒株和FCS（<8%）
混合物總體積為5 ml。輕輕搖勻，室溫培養(yǎng)30分鐘即完成治療。終止方法同上。注意：在病毒從細(xì)胞培養(yǎng)液中收集時(shí)，可多次使用這個(gè)支原體去除過(guò)程，以確保所有支原體已被清除。
支原體清除效果鑒定：
治療后細(xì)胞或病毒可正常傳代四次后再檢測(cè)。因?yàn)橹гw被殺死后，會(huì)釋放游離DNA到培養(yǎng)液中，此時(shí)檢測(cè)會(huì)有假陽(yáng)性。推薦使用Minverva公司高敏感的Venor®Gem支原體PCR檢測(cè)試劑盒。
德國(guó)Minerva Biolabs公司的Mynox®及Mynox® Gold產(chǎn)品為上海締一生物生物科技有限公司代理。清除支原體的好產(chǎn)品選Mynox®。
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