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要選一款合適的支原體檢測試劑盒，有如下幾個評價指標：
1. 靈敏度。
靈敏度常用支原體基因組的拷貝數(shù)或支原體菌株的CFU表示。
2. 特異性和廣譜性。
質(zhì)量好的試劑盒應(yīng)檢測的支原體物種越多越多，并且特異性強，即只針對支原體，不針對其他細菌等微生物，沒有交叉反應(yīng)。
3. 穩(wěn)定性。
凍干粉比液體試劑的穩(wěn)定性高。
4. 樣本類型及樣本處理。
一款好的試劑盒，會標出它適合的樣本類型，也會說明如何處理樣本。要注意有的樣本含有抑制PCR反應(yīng)的物質(zhì)，因此需要處理。
5. 對照品。
一個好的試劑盒，會帶有陽性對照和內(nèi)控對照。內(nèi)控對照是用于監(jiān)測PCR是否正常。如果樣本含有抑制PCR的物質(zhì)，則內(nèi)控對照的條帶會發(fā)生缺失。有嚴重支原體污染的樣本由于樣本中的支原體對內(nèi)控對照產(chǎn)生了競爭性抑制，因此支原體條帶越強，內(nèi)控條帶越弱（下圖）。
圖. 1. 100 bp DNA Ladder；2. 陰性對照，有內(nèi)控條帶；3. 陽性對照，有支原體陽性條帶；4. 樣本有PCR抑制劑；5.陰性樣本；6.陽性樣本，支原體污染較輕；7.陽性樣本，支原體污染較重。圖片來自Minerva Biolabs公司生產(chǎn)的Venor®GeM Advance支原體檢測試劑盒說明書
但支原體核酸檢測法（NAT）并沒有載入我國藥典。我們藥典的是支原體培養(yǎng)法和DNA染色法。但2018年《中國藥事》第8期上，中國食品藥品檢定研究院刊發(fā)了一篇文章——《支原體檢查的核酸檢測方法及方法學(xué)驗證的思考》，提出提出要與接軌，逐漸推進NAT的開展，因其“具有快速、靈敏、便捷等特點”。
歐洲藥典規(guī)定，核酸法如替代培養(yǎng)基，核酸法的靈敏度需達到10 CFU·mL-1；如替代DNA染色法，核酸法的靈敏度需達到100 CFU·mL-1。該文也提出，需對NAT進行特異性、低檢出限和耐用性的驗證。
因此，對于需要NAT法檢查支原體的生物制品和細胞治療產(chǎn)品企業(yè)，可選擇試劑盒已經(jīng)驗證并提供有參比物質(zhì)的廠家，盡管后續(xù)仍需按照待測樣本類型進行方法的適用性驗證，并同步開展藥典方法的平行檢測研究，但已為NAT法檢查支原體帶來極大的方便。
Minerva Biolabs公司是著名的微生物污染控制公司，創(chuàng)始人來自于德國的羅伯特·科赫微生物研究所。其支原體檢測和祛除產(chǎn)品，在世界上居于較高位置。其中提供的用于藥品或生物制品企業(yè)過程控制的試劑盒和標準品如下：
（qPCR法）支原體檢測試劑盒
英文品名： Venor®GeM qEP
貨號與規(guī)格： 11-9025，25 tests/盒
11-9100，100 tests/盒
11-9250，250 tests/盒
（PCR法）支原體檢測試劑盒
注：不含聚合酶
英文： Venor® GeM Classic
貨號與規(guī)格： 11-1025，25 tests/盒
11-1050，50 tests/盒
11-1100，100 tests/盒
11-1250，250 tests/盒
10CFU支原體靈敏度標準品
品名：10CFU™ Sensitivity Standards
產(chǎn)品 | 貨號 | 規(guī)格 | NCTC | ATCC |
精氨酸支原體 | 102-1003 | 3管10CFU支原體標準品+2管陰性對照/盒 | 10129 | 23838 |
口腔支原體 | 102-2003 | 10112 | 23714 | |
雞敗血支原體 | 102-3003 | 10115 | 19610 | |
肺炎支原體 | 102-4003 | 10119 | 15531 | |
關(guān)節(jié)液支原體 | 102-5003 | 10124 | 25204 | |
發(fā)酵支原體 | 102-6003 | 10117 | 19989 | |
豬鼻支原體 | 102-7003 | 10130 | 17981 | |
萊氏無膽甾原體 | 102-8003 | 10116 | 23206 | |
螺原體 | 102-9003 | 10164 | 27556 | |
支原體套裝 （包含EP 2.6.7/ JP17版G3章列舉的所有支原體物種） | 102-0002 | 2管10CFU支原體標準品+2管陰性對照/盒 | -- | -- |
100CFU支原體靈敏度標準品
品名：100CFU™ Sensitivity Standards
產(chǎn)品 | 貨號 | 規(guī)格 | NCTC | ATCC |
精氨酸支原體 | 103-1003 | 3管10CFU支原體標準品+2管陰性對照/盒 | 10129 | 23838 |
口腔支原體 | 103-2003 | 10112 | 23714 | |
雞敗血支原體 | 103-3003 | 10115 | 19610 | |
肺炎支原體 | 103-4003 | 10119 | 15531 | |
關(guān)節(jié)液支原體 | 103-5003 | 10124 | 25204 | |
發(fā)酵支原體 | 103-6003 | 10117 | 19989 | |
豬鼻支原體 | 103-7003 | 10130 | 17981 | |
萊氏無膽甾原體 | 103-8003 | 10116 | 23206 | |
唾液支原體 | 103-1103 | 10113 | 23064 |
注意：
使用時，應(yīng)嚴格遵循說明書操作流程。任何偏離可能會造成結(jié)果誤差。
加入100CFU標準品的樣品不能超濾濃縮，否則會導(dǎo)致結(jié)果不可靠。
100CFU/ml不能稀釋為10CFU/ml，因支原體存在集聚現(xiàn)象，在溶液中非均一狀態(tài)。
上海締一生物生物科技有限公司作為Minerva公司中國區(qū)總代理，十幾年來，不斷為中國生物研究實驗室，以及眾多生物制品企業(yè)，提供了完整高效的支原體等微生物檢測及祛除解決方案。如有任何需求，可與我們聯(lián)系。
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